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A12 - Charakterisierung von Protein A-spezifischen DNA-Aptameren mittels SPR

Event
11. Dresdner Sensor-Symposium 2013
2013-12-09 - 2013-12-11
Dreikönigskirche - Haus der Kirche Dresden
Chapter
1. Biosensorik und Point of Care
Author(s)
V. Tröger - TU Dresden/D, B. Strehlitz, R. Stoltenburg - Helmholtz-Zentrum für Umweltforschung (UFZ), Leipzig/D, S. Schmieder, F. Sonntag - Fraunhofer IWS, Dresden/D
Pages
178 - 182
DOI
10.5162/11dss2013/A12
ISBN
978-3-9813484-5-3
Price
free

Abstract

In dieser Arbeit wird die Kombination des neuen DNA-Aptamers für Protein A (PA#2/8) mit dem etablierten liSPR-Messsystem vorgestellt. Dazu wurde eine universelle Methode zur spezifischen Aptamer-Funktionalisierung auf SPR-Chips mittels Nanospotting-Technologie charakterisiert und optimiert. Mit dieser konnte durch SPR-basierte Interaktionsstudien gezeigt werden, dass das DNAAptamer PA#2/8 zwischen Protein A als seinem spezifischen Zielmolekül und dem verwandten Immunglobulin-bindenden Protein G unterscheidet. Des Weiteren wurde anhand einer Konzentrationsreihe eine Nachweisgrenze von 100 nM und ein Detektionsmaximum von 100 μM Protein A ermittelt. Die Spezifität des Aptamers PA#2/8 für Protein A konnte durch SPR-Messungen mit den Proteinen BSA, Casein und humanem Thrombin gezeigt werden, welche zu keinem unspezifischen Bindungssignal führten. Damit konnte erfolgreich ein Assay zur Charakterisierung von Protein A-spezifischen DNA-Aptameren etabliert werden.

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